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綜合評價C18色譜柱性能的實驗方法介紹

點擊次數(shù):3059 發(fā)布時間:2013-05-17

液相色譜中使用C18柱的反相色譜法以生物體相關(guān)物質(zhì)為分析對象,能夠滿足主要研究領(lǐng)域的需要,使用。而隨著硅膠原料、鍵合方式、封尾方式的不同,生產(chǎn)出的色譜柱性能也不同,市場上則因此有數(shù)以百計性能不同的C18柱。而評價這些色譜柱的性能一般需要從以下4點入手:

1、對化合物的保留能力;

2、對酸性及中性化合物的理論塔板數(shù)和峰形

3、對性(堿性)化合物的峰形

4、對配位化合物的峰形。

針對上述四點原則,本公司建立了統(tǒng)一的標準,以此來評價自己生產(chǎn)的C18色譜柱。

具體測定方法如下:

樣品:尿嘧啶-甲苯-苯乙烷-阿米替林-醌茜五種物質(zhì)混合物;

CoMetro液相色譜儀-等度系統(tǒng)(包括:6000LDI恒流泵,6000PVW紫外/可見可編程檢測器);

紫外/可見檢測器:波長210nm;

流動相:5mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH=7-甲醇=20:80;

流速:1.0mL/min

柱溫:25

在此方法下,這五種物質(zhì)的色譜行為都能夠側(cè)面反映色譜柱某一項性能的大致情況,有較好的科學性和說服力,這五種物質(zhì)的結(jié)構(gòu)是及具體作用如下:

尿嘧啶


典型的性化合物,親水性*,在C18色譜柱中幾乎沒有保留,則可以用來測定系統(tǒng)的死時間。

甲苯/苯乙烷

 

非性化合物,不會與C18色譜柱中的殘余硅羥基作用,則可以用來標定色譜柱的理論塔板數(shù),同時其峰良好也是對色譜柱的基本要求。

阿米替林


含氮有機堿,在中性環(huán)境下能形成穩(wěn)定的氮正離子,能與色譜柱中的殘余硅羥基形成靜電作用,其拖尾因子能側(cè)面反映色譜柱殘余硅羥基的數(shù)量。

 

 

醌茜


典型的螯合物,能與色譜柱中的金屬離子作用,其拖尾因子則可以側(cè)面反映出色譜柱中金屬離子的含量。

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